TIANcombi DNS Lyse & Det PCR komplekts

Ātra DNS attīrīšana no dažādiem materiāliem PCR noteikšanai.

TIANcombi DNS Lyse & Det PCR komplektam ir unikāls iepakojuma dizains, kas ietver visus reaģentus ātrai genoma DNS sagatavošanai un PCR amplifikācijai. Tas ir piemērojams viena soļa genoma DNS attīrīšanai no dažādiem paraugiem (augu audi, sēklas, dzīvnieku audi, asinis, raugs un baktērijas) un sekojošai PCR amplifikācijai un noteikšanai. Olbaltumvielu, RNS un citu sekundāro metabolītu noņemšana, organisko šķīdinātāju ekstrakcija, kā arī etanola izgulsnēšanas posmi nav nepieciešami visā attīrīšanas procesā, padarot darbību vienkāršu un ātru. Produkta kvalitāte ir stabila un uzticama.

Komplektā iekļautais 2 × Det PCR MasterMix ir ļoti saderīgs PCR reaģents, kas spēj efektīvi un specifiski pastiprināt DNS, nenoņemot piemaisījumus, piemēram, olbaltumvielas. Šis reaģents satur Taq DNS polimerāzi, dNTP, MgCl2, buferšķīdums, kā arī PCR reakcijas pastiprinātājs, optimizētājs un stabilizators. Reaģenta lietošana padara PCR reakciju ātru, vienkāršu, jutīgu, specifisku un stabilu. Tāpēc šis komplekts ir īpaši piemērots augstas caurlaides spējas skrīningam.

Kaķis Nē Iepakojuma izmērs
4992527 20 µl × 50 rxn
4992528 20 µl × 200 rxn

 

 


Produkta detaļas

Eksperimentāls piemērs

Bieži uzdotie jautājumi

Produktu birkas

Iespējas

■ Vienkārši un ātri: DNS no dažādiem audiem var iegūt 5 minūtēs, neizmantojot šķidru slāpekli.
■ Plašs pielietojums: piemērojams augu lapām, sēklām, dzīvnieku audiem, asins paraugiem (svaigas asinis, antikoagulācija, asins recekļi, žāvēti asins plankumi utt.), Raugam un baktērijām.
■ Spēcīga saderība: PCR reaģents ir piemērots DNS, kas iegūts no dažādiem paraugu avotiem, amplifikācijai.

Lietojumprogrammas

■ Gēnu noteikšana: ideāla izvēle liela mēroga gēnu noteikšanai.

Svarīgas piezīmes

■ Paraugiem, kas satur augstu fenolu līmeni, piemēram, kokvilnas lapas, parauga ievades daudzumam noteikti jābūt mazākam par 0,4 mg, pretējā gadījumā tiks ietekmēta PCR reakcija.

Visus produktus var pielāgot ODM/OEM. Lai iegūtu sīkāku informāciju,lūdzu, noklikšķiniet uz Pielāgots pakalpojums (ODM/OEM)


  • Iepriekšējais:
  • Nākamais:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Exampl DNS tika iegūta attiecīgi no 5 mg kukurūzas, kviešu, rīsu, sojas pupu un kokvilnas lapām un sēklām. DNS tika pastiprināta ar PCR, izmantojot īpašus praimerus. Katrā joslā tika ielādēti 6 μl DNS no kopējiem 20 μl eluentiem.
    1: Pozitīvās kontroles genoms; 2: atstājiet paraugus; 3: sēklu paraugi; 4: NTC; 5: D2000 gruntējumi
    Experimental Example M: TIANGEN marķieris D2000; 1: Pozitīva kontrole;
    2-7: žāvētu asins plankumu skaits uz filtrpapīra ir attiecīgi 1-6; 8: negatīva kontrole.
    3 mm perforators tika izmantots, lai no filtrpapīra izvilktu izžuvušos asins plankumus kā materiālu ekstrakcijas testam.
    Katrā joslā tika ielādēti 6 μl DNS no kopējiem 20 μl eluentiem.
    Experimental Exampl M: TIANGEN marķieris D2000; 1: Pozitīva kontrole (kā veidne tika izmantota genoma DNS); 2-7: pievienoto asiņu daudzums ir attiecīgi 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl un 60 μl; 8-13: pievienoto asiņu daudzums ir attiecīgi 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl un 60 μl; 14: NTC.
    6 μl DNS no kopējiem 20 μl eluentiem tika ievietoti agarozes želejā.
    J: Nav pastiprināšanas joslu

    A-1 veidne

    ■ Šablons satur olbaltumvielu piemaisījumus vai Taq inhibitorus utt. —— Notīriet DNS veidni, noņemiet olbaltumvielu piemaisījumus vai ekstrahējiet veidnes DNS ar attīrīšanas komplektiem.

    ■ Šablona denaturācija nav pabeigta ——Pienācīgi paaugstiniet denaturācijas temperatūru un pagariniet denaturācijas laiku.

    ■ Veidnes pasliktināšanās-atkārtoti sagatavojiet veidni.

    A-2 Primer

    ■ Slikta praimeru kvalitāte-atkārtoti sintezējiet grunti.

    ■ Gruntējuma noārdīšanās —— Saglabājiet augstas koncentrācijas praimerus nelielā tilpumā. Izvairieties no vairākkārtējas sasalšanas un atkausēšanas vai ilgstošas ​​4 ° C konservēšanas.

    ■ Nepareiza gruntējuma konstrukcija (piemēram, gruntējuma garums nav pietiekams, starp primeriem izveidojies dimērs utt.)

    A-3 Mg2+koncentrēšanās

    ■ Mg2+ koncentrācija ir pārāk zema - Pareizi palieliniet Mg2+ koncentrācija: optimizējiet Mg2+ koncentrācija ar virkni reakciju no 1 mM līdz 3 mM ar intervālu 0,5 mM, lai noteiktu optimālo Mg2+ koncentrācija katrai veidnei un gruntējumam.

    A-4 Rūdīšanas temperatūra

    ■ Augsta atlaidināšanas temperatūra ietekmē gruntējuma un šablona saistīšanos. —–Samaziniet atlaidināšanas temperatūru un optimizējiet stāvokli ar 2 ° C gradientu.

    A-5 Pagarināšanas laiks

    ■ Īss pagarinājuma laiks - pagariniet pagarinājuma laiku.

    J: Viltus pozitīvs

    Parādības: Negatīvie paraugi parāda arī mērķa secības joslas.

    A-1 PCR piesārņojums

    ■ Mērķsekvences vai amplifikācijas produktu savstarpējs piesārņojums - uzmanīgi nepipetējiet paraugu, kas satur mērķa secību negatīvajā paraugā, un neizlejiet tos no centrifūgas mēģenes. Reaģentus vai aprīkojumu vajadzētu autoklāvēt, lai likvidētu esošās nukleīnskābes, un piesārņojuma esamība jānosaka ar negatīvas kontroles eksperimentiem.

    ■ Reaģentu piesārņojums —— reaģentus izlīdziniet un uzglabājiet zemā temperatūrā.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ koncentrācija ir pārāk zema - Pareizi palieliniet Mg2+ koncentrācija: optimizējiet Mg2+ koncentrācija ar virkni reakciju no 1 mM līdz 3 mM ar intervālu 0,5 mM, lai noteiktu optimālo Mg2+ koncentrācija katrai veidnei un gruntējumam.

    ■ Nepareizs gruntējuma dizains un mērķa secībai ir homoloģija ar mērķa secību. —–Pārveidojiet gruntējumus.

    J: Nespecifiska pastiprināšana

    Parādības: PCR amplifikācijas joslas neatbilst gaidāmajam izmēram, vai nu lielam, vai mazam, vai dažreiz rodas gan specifiskas amplifikācijas joslas, gan nespecifiskas amplifikācijas joslas.

    A-1 Primer

    ■ Slikta gruntējuma specifika

    ——Pārveidot gruntējumu.

    ■ Gruntējuma koncentrācija ir pārāk augsta - Pareizi paaugstiniet denaturācijas temperatūru un pagariniet denaturācijas laiku.

    A-2 Mg2+ koncentrēšanās

    ■ Mg2+ koncentrācija ir pārāk augsta —— Pareizi samaziniet Mg2+ koncentrāciju: optimizējiet Mg2+ koncentrācija ar virkni reakciju no 1 mM līdz 3 mM ar intervālu 0,5 mM, lai noteiktu optimālo Mg2+ koncentrācija katrai veidnei un gruntējumam.

    A-3 Termostabila polimerāze

    ■ Pārmērīgs fermentu daudzums - atbilstoši samaziniet fermentu daudzumu ar 0,5 V intervālu.

    A-4 Rūdīšanas temperatūra

    ■ Rūdīšanas temperatūra ir pārāk zema ——Pienācīgi paaugstiniet atlaidināšanas temperatūru vai izmantojiet divpakāpju atlaidināšanas metodi

    A-5 PCR cikli

    ■ Pārāk daudz PCR ciklu - samaziniet PCR ciklu skaitu.

    J: Patchy vai uztriepes joslas

    A-1 Primer—— slikta specifika —— pārprojektējiet grunti, mainiet gruntējuma atrašanās vietu un garumu, lai uzlabotu tā specifiskumu; vai veikt ligzdotu PCR.

    A-2 veidnes DNS

    - Šablons nav tīrs. - Attīriet veidni vai iegūstiet DNS ar attīrīšanas komplektiem.

    A-3 Mg2+ koncentrēšanās

    - Mg2+ koncentrācija ir pārāk augsta - pareizi samaziniet Mg2+ koncentrācija: optimizējiet Mg2+ koncentrācija ar virkni reakciju no 1 mM līdz 3 mM ar intervālu 0,5 mM, lai noteiktu optimālo Mg2+ koncentrācija katrai veidnei un gruntējumam.

    A-4 dNTP

    ——DNTP koncentrācija ir pārāk augsta —–Pienācīgi samaziniet dNTP koncentrāciju

    A-5 Rūdīšanas temperatūra

    ——Pārāk zema atlaidināšanas temperatūra ——Pienācīgi paaugstiniet atlaidināšanas temperatūru

    A-6 cikli

    ——Pārāk daudz ciklu —— Optimizējiet cikla numuru

    J: Cik daudz veidnes DNS jāpievieno 50 μl PCR reakcijas sistēmā?
    ytry
    J: Kā pastiprināt garus fragmentus?

    Pirmais solis ir izvēlēties piemērotu polimerāzi. Parastā Taq polimerāze nevar tikt koriģēta 3'-5 'eksonukleāzes aktivitātes trūkuma dēļ, un neatbilstība ievērojami samazinās fragmentu pagarināšanas efektivitāti. Tāpēc parastā Taq polimerāze nevar efektīvi pastiprināt mērķa fragmentus, kas lielāki par 5 kb. Taq polimerāze ar īpašu modifikāciju vai cita augstas precizitātes polimerāze jāizvēlas, lai uzlabotu pagarinājuma efektivitāti un apmierinātu garu fragmentu pastiprināšanas vajadzības. Turklāt garu fragmentu pastiprināšanai ir nepieciešama arī atbilstoša gruntējuma konstrukcijas, denaturācijas laika, pagarinājuma laika, bufera pH korekcija utt. Parasti primeri ar 18-24 bp var radīt labāku ražu. Lai novērstu šablona bojājumus, denaturācijas laiks pie 94 ° C cikla laikā jāsamazina līdz 30 sekundēm vai mazāk, un laikam, līdz temperatūras paaugstināšanai līdz 94 ° C pirms amplifikācijas jābūt mazākam par 1 min. Turklāt, pagarināšanas temperatūras iestatīšana aptuveni 68 ° C un pagarinājuma laika izstrāde atbilstoši ātrumam 1 kb/min, var nodrošināt garu fragmentu efektīvu pastiprināšanu.

    J: Kā uzlabot PCR pastiprināšanas precizitāti?

    PCR amplifikācijas kļūdu līmeni var samazināt, izmantojot dažādas DNS polimerāzes ar augstu precizitāti. Starp visām līdz šim atrastajām Taq DNS polimerāzēm Pfu fermentam ir zemākais kļūdu īpatsvars un visaugstākā precizitāte (skatīt pievienoto tabulu). Papildus fermentu izvēlei pētnieki var vēl vairāk samazināt PCR mutāciju ātrumu, optimizējot reakcijas apstākļus, tostarp optimizējot bufera sastāvu, termostabilās polimerāzes koncentrāciju un optimizējot PCR cikla skaitu.

    Uzrakstiet savu ziņu šeit un nosūtiet to mums